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豚鼠鐵調(diào)素(HEPC)ELISA檢測試劑盒操作步驟

1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀

釋。

80μg/L  5號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

40μg/L  4號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

20μg/L  3號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10μg/L  2號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

5.0μg/L  1號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、

待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，

然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡

量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.  配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此

重復(fù)5次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。 

7.  溫育：操作同3。

8.  洗滌：操作同5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15分鐘.

10.  終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.  測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止

液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。